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Estudio de biocompatibilidad con células osteoblásticas

El objetivo del ensayo es estudiar la biocompatibilidad de los implantes MPI en presencia de células osteoblásticas de osteosarcoma humano MG-63.

Este ensayo ha sido realizado por en Centro Nacional de Microscopía Electrónica (CNME) de la Univesidad Complutense de Madrid.

Para evaluar la citotoxicidad de los implantes, se ponen en contacto con células humanas durante un tiempo determinado tras el cual se realiza una valoración de las células que han estado en contacto con éstos. 

Se ha determinado tanto la viabilidad celular como estudios de extensión y colonización celular mediante la observación por microscopía electrónica de barrido (SEM) y microscopía de confocal. El crecimiento celular sobre el implante se estudió mediante la adición de solución de Alamar Blue (AbDSerotec, Oxford, UK) al 10% (v/v) a 3, 6 y 10 días, siguiendo las instrucciones del fabricante. La intensidad de absorbancia resultante se midió a 570/600 nm en un espectrofotómetro de UV-visible Unicam UV-500. 

Los estudios por SEM se realizaron tras un periodo de incubación del implante con células osteoblásticas de 15 días, previa fijación con glutaraldehído al 2.5% y deshidratación gradual con disoluciones crecientes de etanol /PBS (30, 60, 80, 90 y 95%) y posterior secado en estufa de vacío durante 4 días. La observación por SEM se realizó en microscopio de barrido de emisión de campo JEOL-JSM-6335F operando a 10 kV (Tokyo, Japan).

Para los estudios por microscopía de confocal, los implantes se han incubado con las células osteoblásticas durante 15 días. Previo al estudio, las muestras se fijaron con paraformaldehído al 4% y se tiñeron con DAPI y Atto 656-faloidina, con el fin de teñir los núcleos de las células y el citoesqueleto celular, respectivamente. La observación por microscopía de confocal se realizó en un microscopio Olympus FV1200.

Los resultados obtenidos muestran una buena biocompatibiliadad del implante en presencia de células osteoblásticas. Los resultados de viabilidad celular analizados demuestran que las células se adhieren y proliferan a lo largo de todo el implante, y que este crecimiento celular aumenta con el paso del tiempo, hasta los 10 días. 

Los estudios de extensión celular y colonización del implante por SEM se realizaron en la zona rugosa del implante, mostrando una colonización total de las células en toda la superficie del implante con una adecuada extensión celular mediante la proyección de filopodios como elementos de anclaje celular.

Los estudios por microscopía de confocal confirman estos resultados, mostrando en la imagen una agrupación de células bien desarrolladas con la actina del citoesqueleto organizada en forma de haces paralelos concluyendo que las células están totalmente extendidas.

En conclusión, la superficie del implante dental MPI no es citotóxica y mejora la proliferación celular osteoblástica. Mediante este ensayo queda reflejada la efectividad del tratamiento superficial Integratec®, demostrando plazos de oseointegración reducidos.